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PCR產(chǎn)物純化效率提升方法
日期:2024-10-19 05:34
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摘要:
PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,在條帶單一無其他雜帶的情況下,可以直接對產(chǎn)物進行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下:
1.模板純度,有較多蛋白或其他雜質(zhì)時,會一定程度影響pcr效率;
2.模板量,過高的模板量反而會降低pcr效率特異性;
3.引物,引物的長度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化,其次要控制引物gc含量;
4.聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;
5.mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效率;
6.退火溫度:退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退...
PCR擴增完成后需要進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,在條帶單一無其他雜帶的情況下,可以直接對產(chǎn)物進行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下:
1.模板純度,有較多蛋白或其他雜質(zhì)時,會一定程度影響pcr效率;
2.模板量,過高的模板量反而會降低pcr效率特異性;
3.引物,引物的長度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化,其次要控制引物gc含量;
4.聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;
5.mg離子濃度,mg離子濃度過高會降低特異性,濃度過低會降低效率;
6.退火溫度:退火溫度低,效率會高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會提高,需優(yōu)化。