主營(yíng)產(chǎn)品：
生化試劑，標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)照品，PCR試劑盒，?核酸檢測(cè)試劑盒，熒光定量檢測(cè)試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測(cè)試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測(cè)試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測(cè)試劑盒，細(xì)胞株，原代細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)品。代理并銷(xiāo)售進(jìn)口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細(xì)胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
咨詢(xún)電話(huà)：18117197628
新聞詳情
細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程
日期：2025-04-26 22:22
瀏覽次數(shù)：156
摘要：細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程：
1、細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：
試劑：PBS,胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來(lái)，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。
2、細(xì)胞換液：
試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；
流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶...
細(xì)胞培養(yǎng)一般過(guò)程：
1、細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：
試劑：PBS,胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來(lái)，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。
2、細(xì)胞換液：
試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；
流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長(zhǎng)得不是很多，細(xì)胞之間沒(méi)有黏在一起，因此不需要加入胰酶來(lái)消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。
3、細(xì)胞凍存：
試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶，滲透壓會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí)，會(huì)散發(fā)熱量，所以?xún)龃嬉盒杼崆爸苽洹?/span>
因?yàn)榧?xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過(guò)夜，后再放入液氮罐。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
試劑：含血清的培養(yǎng)基；
流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開(kāi)凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養(yǎng)液。
1、細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：
試劑：PBS,胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來(lái)，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。
2、細(xì)胞換液：
試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；
流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長(zhǎng)得不是很多，細(xì)胞之間沒(méi)有黏在一起，因此不需要加入胰酶來(lái)消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。
3、細(xì)胞凍存：
試劑：凍存液，PBS，胰酶，含血清的培養(yǎng)基；
流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶，滲透壓會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí)，會(huì)散發(fā)熱量，所以?xún)龃嬉盒杼崆爸苽洹?/span>
因?yàn)榧?xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過(guò)夜，后再放入液氮罐。
4、細(xì)胞復(fù)蘇：
試劑：含血清的培養(yǎng)基；
流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開(kāi)凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養(yǎng)液。