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ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡結(jié)果分析
ELISA(酶聯(lián)免 疫吸附試驗(yàn))是一種用于檢測抗原或抗體濃度的免 疫學(xué)試驗(yàn)。如果ELISA實(shí)驗(yàn)的顯色淡或靈敏度低,可能有多種原因。
ELISA實(shí)驗(yàn)顯色淡的原因及解決方案:
原因一:試劑盒在運(yùn)輸途中時間太長,溫度太高。
解決方案:盡量縮短運(yùn)輸時間,夏季應(yīng)放冰塊降溫。
原因二:試劑盒未充分平衡。
解決方案:試劑盒從2~8℃冰箱取出后打開盒蓋,于室溫平衡至少20分鐘,確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。
原因三:培養(yǎng)箱溫度不足37℃。
解決方案:注意培養(yǎng)箱溫度,放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定,非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意。
原因四:保溫時間不足。
解決方案:校正定時鐘準(zhǔn)確定時。
原因五:洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加。
解決方案:按說明書要求保留洗滌時間,準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)。
原因六:移液器吸液量不足,吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔。
解決方案:校正移液器,吸嘴要配套,裝吸嘴時要緊密,吸嘴內(nèi)壁要清潔,一次性使用。
原因七:蒸餾水水質(zhì)有問題。
解決方案:使用新鮮合格的蒸餾。
原因八:底物作用時間不足。
解決方案:準(zhǔn)確定時。
顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說,顯色時間過短,結(jié)果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加。