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HRP底物氯萘酚操作步驟

日期:2024-10-19 05:27
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摘要:HRP底物氯萘酚操作步驟

氯萘酚可以形成一種藍(lán)黑色產(chǎn)物。敏感性低于DAB,且產(chǎn)物可溶于醇中。它適用于當(dāng)DAB反應(yīng)形成較高背景或要求改變產(chǎn)物的顏色。

1、需要的溶液和特殊設(shè)備

0.03%氯萘酚,用無水乙醇溶解(貯存在-20℃),0.05 mol/LTris(pH7.6),過氧化氫,Gelvatol或者M(jìn)owiol,光學(xué)顯微鏡(通常帶有照相機(jī)以便于記錄結(jié)果)。

2、 操作步驟

(1) 氯萘酚貯存液的準(zhǔn)備:用10 mL無水乙醇溶解0.3 g氯萘酚,貯存于-20℃;

(2) 加100 μL 氯萘酚貯存液至10 mL 0.05 mol/LTris(pH7.6);

(3) 加0.1 mL 3%過氧化氫于水中。過氧化氫一般是以30%的溶液提供,4℃可存放1個月;

(4) 白色沉淀可用濾紙過濾去除;

(5) 加此溶液到標(biāo)本中,并在室溫孵育10~40 min,水洗終止反應(yīng);

(6) 優(yōu)化:如果需要,進(jìn)行復(fù)染,但只可使用水溶性染料;

(7) 用Gelvatol或者M(jìn)owiol封片。

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